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[发明专利]一种检测qPCR过程中的非特异性扩增的引物组、试剂盒以及检测方法-CN202010498185.9有效
发明人：王家旺;张彬 -专利权人：健生生物技术有限公司
申请日： 2019-03-22 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12Q1/6876 文献下载
摘要：本发明提供了一种检测qPCR过程中的非特异性扩增的引物组、试剂盒以及检测方法，属于核酸的Real Time PCR检测技术领域，本发明中所述的引物组包括4条非特异性扩增正向引物；所述非特异性扩增的正向引物的核苷酸序列如本发明提供的试剂盒包括所述引物组，还包括通用反向扩增引物和LNAFAM水解探针。本发明提供的检测非特异性扩增的试剂盒以及非特异性扩增的检测方法能够定量检测含有聚合酶(如Taq DNA聚合酶)的PCR反应系统的非特异扩增；定量检测互补同源序列对检测实时PCR非特异性扩增的影响；检测退火或者延伸温度对检测实时PCR非特异性扩增的影响；检测退火或者延伸时间对检测实时PCR非特异性扩增的影响。
一种检测 qpcr 过程中的非特异性扩增引物试剂盒以及方法

[发明专利]一种寡聚DNA抑制非特异性扩增的方法-CN202310926223.X在审
发明人：梁兴国;宋子婷;安然;胡坤灵;杜书涵 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2023-07-25 - 公布日： 2023-10-03 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本申请公开了一种寡聚DNA抑制背景DNA存在条件下非特异性扩增产物的方法，属于核酸扩增领域。针对现有技术中存在的“非特异性扩增严重影响核酸扩增的灵敏度和特异性，且现有抑制方法存在难以高效抑制、序列设计繁琐等”的问题，本申请的技术方案中，在核酸扩增时，加入带有5’‑凸出端和短茎环结构的寡聚DNA，适用于恒温扩增、PCR反应体系扩增(变温扩增)中。本申请的技术方案不需根据模板序列进行特异性的设计，仅需10nM‑500nM寡聚DNA即可实现对非特异性扩增的高效抑制，不需要进行修饰，大大降低了成本，既可以抑制引物与非目标片段结合产生的非特异性扩增，还可以抑制引物二聚体，尤其可抑制高背景DNA条件下产生的非特异性扩增。
一种 dna 抑制非特异性扩增方法

[发明专利]检测基因突变的引物、试剂盒及方法-CN201811386433.X在审
发明人：孙培 -专利权人：北京昱晟达医疗科技有限公司
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：该引物包括上游引物和下游引物，上游引物包括依次相连的通用扩增序列、荧光探针序列以及目的片段上游特异性扩增序列；下游引物包括目的片段的下游特异性扩增序列；目的片段上游特异性扩增序列是区分野生型目的片段与突变型目的片段的特异性扩增序列将探针设计在目的片段特异性扩增序列的上游，使得目的片段长度可以按需缩短，提高了对血浆cfDNA类样本的利用率和临床应用价值。而在荧光探针序列的上游同时设置通用扩增序列，不仅方便后续扩增，减少整体引物的用量，进而避免整体引物所需用量太大而导致的扩增特异性降低，而且通用扩增序列的存在还有助提高该引物使用的通用性。
目的片段特异性扩增引物扩增序列上游荧光探针序列基因突变上游引物下游引物试剂盒扩增通用临床应用探针设计依次相连突变型需用量野生型种检测血浆样本检测

[发明专利]一种优化的DNA线性扩增方法及试剂盒-CN202110088796.0在审
发明人：杨国华 -专利权人：上海羿鸣生物科技有限公司
申请日： 2021-01-22 - 公布日： 2022-07-29 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种DNA目标区域的扩增方法。本发明提供一种DNA目标区域的扩增方法，包括：通过特异性引物线性扩增包括目标区域的片段化DNA，以提供线性扩增产物，所述特异性引物的3’末端有二象性功能基团修饰，所述特异性引物的3’端部分核苷酸骨架的磷脂键被硫代修饰，所述的二象性功能基团用于阻止特异性引物的3’末端与其他寡聚核苷酸发生连接反应，同时能被特定的酶切除，以进行特异性引物的线性扩增反应。本申请所提供的DNA目标区域的扩增方法，通过在特异性引物中引入硫代修饰，有效降低了线性扩增过程中的非特异性扩增。
一种优化 dna 线性扩增方法试剂盒

[发明专利]一种快速高效的DNA 5’侧翼序列克隆方法-CN202210033141.8有效
发明人：龚春梅;李佳阳;任洁洁;珠拉太;周文菲;唐磊;余有本;白娟;周杰;王文钊 -专利权人：西北农林科技大学
申请日： 2022-01-12 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速高效的DNA5’侧翼序列克隆方法，包括以下2个主要步骤：(1)待测样本为模板，通过不同LAD引物组合与基因特异性R引物配对，使用热不对称交错PCR的方法进行第一轮PCR扩增；(2)以不同稀释倍数的第一轮PCR扩增产物作为模板，结合巢式PCR的引物设计方法，使用通用引物AC1与设计在第1轮特异性R引物上游的不同基因特异性R引物配对，通过热不对称交错PCR的方法进行第二轮PCR扩增。配合判断方法能够快速鉴别正确扩增条带范围，在原HiTail‑PCR的基础上由3轮扩增缩减为2轮扩增，且可由特异引物之间的已知间隔距离快速锁定特异扩增并排除部分非特异扩增，大幅减少非特异扩增带来的干扰。
一种快速高效 dna 侧翼序列克隆方法

[发明专利]多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测肺炎支原体的方法-CN201910209767.8在审
发明人：申阿东;王亚翠;王毅;焦伟伟;李洁琼;孙琳;肖婧;綦辉;申晨;徐放;祁雪;全舒婷 -专利权人：首都医科大学附属北京儿童医院
申请日： 2019-03-19 - 公布日： 2019-06-25 - 主分类号： C12Q1/6844 文献下载
摘要：本发明公开了一种多交叉恒温扩增结合纳米生物传感检测目的基因的方法，所述方法能够针对肺炎支原体P1基因进行特异性扩增，本发明还提供了用于上述恒温扩增方法的特异性引物组合。本发明提供的多交叉置换扩增方法可以在30分钟内完成整个MCDA扩增，在其对肺炎支原体的特异性基因P1的检测中，检测下限可以低至10fg，具有非常高的灵敏度。另外，本发明提供的扩增方法具有很高的扩增特异性。在对常见的致病菌、条件致病菌及非肺炎支原体DNA的检测中，均为阴性扩增，只有肺炎支原体呈特异性扩增，说明所建立的方法具有极高的特异性，能准确地鉴定肺炎支原体，无假阳性及假阴性结果产生。
肺炎支原体扩增恒温扩增特异性扩增传感检测纳米生物检测特异性引物组合假阴性结果特异性基因条件致病菌致病菌目的基因灵敏度假阳性阴性置换

[发明专利]一种基于HRM检测基因多态性的引物组合物的应用-CN201710519746.7在审
发明人：廖翔;李洪波 -专利权人：北京美莱博医学科技有限公司
申请日： 2017-06-30 - 公布日： 2017-10-24 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提供一种基于HRM检测基因多态性的引物组合物的应用，该引物组合物包括正向引物F、反向引物R、SNP特异引物1和SNP特异引物2；正向引物F和反向引物R用于扩增基因中共有保守序列，正向引物F和SNP特异性引物1用于扩增等位基因1特异性序列，正向引物F和SNP特异性引物2用于扩增基因2特异序列；SNP特异引物1和SNP特异引物2其中之一为5’端增加了GC尾巴的修饰的SNP特异引物。本发明引物组合物应用于基于HRM检侧基因多态性时，其扩增出两个特异性片段，增加了各扩增产物Tm之间的差异，有效排除了假阳性结果，从而提高了结果的特异性和可靠性。
一种基于 hrm 检测基因多态性引物组合应用

[发明专利]用于通过原位杂交进行核酸的多路复用检测的方法-CN202080027949.4在审
发明人： X-J.马;B.张;L-C.王;H.卢;L.王;H.宗 -专利权人：领先细胞医疗诊断有限公司
申请日： 2020-02-14 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： C12Q1/6841 文献下载
摘要：本发明涉及通过使包含细胞的样品同与靶核酸特异性地杂交的靶探针组、与对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子或前置前置扩增子、与对所述前置扩增子具有特异性的扩增子以及与对所述扩增子具有特异性的标记探针接触从而产生多种靶核酸的特异性标记来进行多种靶核酸的多路复用检测的方法
用于通过原位杂交进行核酸多路复用检测方法

[发明专利]普鲁兰多糖对于提高核酸扩增特异性的应用-CN201811322094.9在审
发明人：关一夫;高雪芹 -专利权人：中国医科大学
申请日： 2018-11-08 - 公布日： 2019-03-19 - 主分类号： C12Q1/6848 文献下载
摘要：一种普鲁兰多糖用于提高核酸扩增特异性的应用。所述应用中将普鲁兰多糖与DNA聚合酶、扩增引物、dNTP、Mg²⁺、扩增模板或待测的靶核酸分子、报告分子中的一种或多种组合成试剂。所述核酸扩增特异性中的核酸扩增方法为热循环扩增方法或等温扩增方法。本发明提出了利用普鲁士多糖来改善等温扩增特异性的创意，并得到了实验验证。
核酸扩增普鲁兰多糖等温扩增应用靶核酸分子报告分子扩增模板扩增引物实验验证热循环扩增

[发明专利]检测融合基因变异的引物组、试剂盒及方法-CN202211552299.2在审
发明人：黄晓强;贺亮;沈建如;刘灿;凌宝;马骥 -专利权人：深圳金域医学检验实验室
申请日： 2022-12-05 - 公布日： 2023-03-07 - 主分类号： C12Q1/6886 文献下载
摘要：本发明公开了一种检测融合基因变异的引物组、试剂盒及方法，根据15个实体瘤常见的140对融合基因容易发生断裂的热点外显子，设计了特异性扩增引物组，所述特异性扩增引物组可以覆盖尽可能多的融合基因伴侣；使用该特异性扩增引物，采用单管多重巢氏PCR扩增的方法对融合基因进行检测，可以减少引物冗余，提高引物扩增效率并降低非特异性扩增，使检测的准确性更高。
检测融合基因变异引物试剂盒方法

[发明专利]一种快速检测人类Y染色体微缺失的试剂盒-CN201510433983.2在审
发明人：李晓辉;刘强 -专利权人：广州市达晖生物技术有限公司
申请日： 2015-07-22 - 公布日： 2015-12-09 - 主分类号： C12Q1/68 文献下载
摘要：本发明提出了一种快速检测人类Y染色体微缺失的试剂盒，包括PCR反应液Ⅰ、PCR反应液Ⅱ；所述PCR反应液Ⅰ包括特异性扩增SRY位点引物、SRY位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY86位点引物、sY86位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY127位点引物、sY127位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY255位点引物、sY255位点荧光探针；所述PCR反应液Ⅱ包括特异性扩增SRY位点引物、SRY位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY84位点引物、sY84位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY134位点引物、sY134位点荧光探针、特异性扩增Y染色体sY254位点引物、sY254位点荧光探针。本发明的试剂盒检测特异性强、灵敏度高。为Y染色体微缺失的临床检测提供一种快速、方便的检测方法。
一种快速检测人类染色体缺失试剂盒

[发明专利]一种基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物、检测试剂盒及其应用-CN202110536972.2有效
发明人：梁旭东 -专利权人：至善时代智能科技（北京）有限公司;至微生物智能科技（厦门）有限公司
申请日： 2021-05-18 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明提供了基于pheS基因鉴定多种葡萄球菌的引物组，包括以下两种或多种引物对：特异性扩增金黄色葡萄球菌的引物对、特异性扩增沃氏葡萄球菌的引物对、特异性扩增表皮葡萄球菌的引物对、特异性扩增人葡萄球菌的引物对、特异性扩增头状葡萄球菌的引物对和特异性扩增溶血葡萄球菌的引物对。所述引物组具有扩增特异性好、检测灵敏度高、同时鉴定多种葡萄球菌的特点。
一种基于 phes 基因鉴定多种葡萄球菌引物检测试剂盒及其应用

[发明专利]一种多重扩增子文库的构建方法及其应用-CN202311055190.2在审
发明人：刘佳;顾凯丽;尹松松;官民晓;王方杰;张亚飞 -专利权人：迈杰转化医学研究（苏州）有限公司
申请日： 2023-08-22 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12Q1/6806 文献下载
摘要：本申请公开了一种多重扩增子文库的构建方法及其应用。所述方法包括：添加特异性分子标签UMI接头后，通过一端特异性引物和一端通用引物对靶标区域进行两轮半特异引物扩增，并在两轮扩增步骤之间使用核酸外切酶消化剩余引物。利用本发明的扩增子建库方法检测基因变异，两轮半特异引物扩增能够高效利用双链模板，通过UMI对扩增子校准扩增错误或测序错误，提高对于超低频突变的检测灵敏度，方法操作简便省时，成本低，适用于多种扩增子建库应用场景
一种多重扩增文库构建方法及其应用

[发明专利]一种同步检测四种苹果病毒的方法-CN201410196186.2无效
发明人：王亚南;曹克强;赵绪生 -专利权人：河北农业大学
申请日： 2014-05-12 - 公布日： 2014-08-06 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：以带有叶芽苹果一年生枝条顶端0～5cm皮层组织或组培苗叶片组织为试材，采用TRIzol法提取组织总RNA，以总RNA为模板，六碱基随机引物进行cDNA合成，以四种病毒特异性引物及内源基因引物进行多重PCR根据琼脂糖凝胶电泳中扩增条带大小判断组织携带病毒情况。判断标准为：未扩增出内源基因特异性片段即代表实验失败；扩增出内源基因特异性片段即代表苹果组织总RNA提取质量符合要求；扩增出内源基因特异性片段及任意病毒特异性片段即代表组织中带有该病毒；扩增出内源基因特异性片段，未扩增出任何病毒特异性片段即代表组织中不带有任何病毒。
一种同步检测苹果病毒方法

[发明专利]一种联合快速检测流行性乙型脑炎病毒、登革病毒和西尼罗病毒试剂盒及其检测方法-CN200910047186.5无效
发明人：曹广文;李淑华;刘世建;常文军;张宏伟 -专利权人：中国人民解放军第二军医大学
申请日： 2009-03-06 - 公布日： 2010-01-20 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种联合快速检测流行性乙型脑炎病毒、登革病毒和西尼罗病毒试剂盒，由主反应液和特异性引物组成。主反应液包括反应缓冲液、禽类成髓细胞瘤病毒反转录酶、核酸酶抑制剂、Bst DNA聚合酶、dNTP、硫酸镁、酣菜碱、焦碳酸二乙脂和处理水；特异性引物包括特异性扩增乙脑病毒引物、特异性扩增登革病毒引物和特异性扩增西尼罗病毒引物本发明用环介导等温扩增技术，设计高度特异性引物，快速检测3种黄病毒，达到高效特异性扩增的目的。本发明提供了检测方法，利用紫外-可见光分光光度计检测反应体系的吸光度值，间接反应目的基因的DNA扩增情况。
一种联合快速检测流行性脑炎病毒西尼罗试剂盒及其方法

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